大战绿妖之后，蜘蛛侠帕克（托比•马奎尔 Tobey Maguire 饰）忍痛拒绝了他仅有的挚爱玛丽（克尔斯滕•邓斯特 Kirsten Dunst 饰），由于欧美电影蜘蛛侠的身份会为自己和亲人带来巨大风险，帕克决定独立承担起蜘蛛侠的责任。
　　帕克一向在忙于应付各种应战：学习超能力的灵活运用；在超级英雄与平凡大学生的双重身份下躲藏自我、小心谨慎地生活等等。帕克对玛丽越来越难以自拔，可是作为蜘蛛侠又不能对玛丽打开心扉。
　　好友哈利由于误会蜘蛛侠而一向处处与其为刁难；仅有的亲人婶婶也对蜘蛛侠的真实身份产生了置疑。同时，新的应战又出现了：凶恶而强大的章鱼博士。帕克在种种压力下肩负起蜘蛛侠的使命。